端粒是真核細(xì)胞染色體末端的?個(gè)特殊結(jié)構(gòu),由?段具有特定重復(fù)的DNA序列和端粒結(jié)合蛋白組成,是維持染色體結(jié)構(gòu)穩(wěn)定的重要因素。端粒酶是?種核糖核酸蛋白酶,能夠利用自身RNA為模板合成端粒DNA,使端粒延伸并維持其穩(wěn)定。端粒酶功能行使最低限度需要兩個(gè)部分,RNA組成和催化亞單位。RNA組分(human telomerase RNA,HTR)為端粒酶合成端粒重復(fù)序列提供了模板,催化亞單位(human telomerase revese transcriptase,hTERT)含有保守的逆轉(zhuǎn)錄酶模體。
研究發(fā)現(xiàn)HTR在正常組織中也存在,呈弱陽(yáng)性。在90%以上的腫瘤組織呈強(qiáng)陽(yáng)性,說明HTR濃度直接反應(yīng)了端粒酶全酶在組織細(xì)胞內(nèi)的量,也間接反應(yīng)了端粒酶的活性強(qiáng)度。
試劑盒通過一步法RT-PCR對(duì)human telomerase RNA進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)合成特異片段,并結(jié)合使用特異的Taqman-MGB熒光探針技術(shù),以實(shí)現(xiàn)實(shí)時(shí)定量的檢測(cè)模板的濃度。TaqmanMGB探針的5'端標(biāo)記為FAM熒光素,3'端標(biāo)記NFQ(Non Fluorescent Quencher)-MGB。