端粒是真核細胞染色體末端的?個特殊結(jié)構(gòu),由?段具有特定重復的DNA序列和端粒結(jié)合蛋白組成,是維持染?體結(jié)構(gòu)穩(wěn)定的重要因素。端粒酶是?種核糖核酸蛋白酶,能夠利用自?RNA為模板合成端粒DNA,使端粒延伸并維持其穩(wěn)定。端粒酶功能?使最低限度需要兩個部分,RNA組成和催化亞單位。RNA組分(human telomerase RNA,hTR)為端粒酶合成端粒重復序列提供了模板,催化亞單(human telomerase revese transcriptase,hTERT)含有保守的逆轉(zhuǎn)錄酶模體。
研究發(fā)現(xiàn)hTERT mRNA與端粒酶的活性相?致,正常組織陰性,80%以上的腫瘤組織呈陽性,說明hTERT可能是合成端粒酶全酶的關(guān)鍵,與腫瘤的關(guān)系更為密切??偨Y(jié)近年文獻,其它各類腫瘤的端粒酶活性表達情況?致如下:頭頸部鱗癌90%,腦腫瘤66?94%,卵巢癌100%,胰腺癌95%,前列腺癌78~90%,神經(jīng)母細胞94%。
試劑盒通過?步法RT-PCR對hTERT mRNA進行反應合成特異片段,并結(jié)合使用特異的Taqman-MGB熒光探針技術(shù),以實現(xiàn)實時定量的檢測模板的濃度。Taqman-MGB探針的5'端標記為FAM熒光素,3'端標記NFQ(Non Fluorescent Quencher)-MGB。